Multi-seasonal field release and spermatization trials of transgenic hypovirulent strains of Cryphonectria parasitica containing cDNA copies of hypovirus CHV1-EP713

Berlin

2005

S. 277-297

1 Abb., 48 Lit. Ang.

Artikel aus einer ZeitschriftUnselbständiges Werk

200125320

Drei im Jahre 1996 gesammelte Isolate von Cryphonectria parasitica aus dem Meshomasic State Forest, Connecticut, USA, wurden gentechnologisch so verändert, dass sie eine chromosomal integrierte vollständige cDNA-Kopie des die Virulenz stark abschwächenden Hypovirus CHV1-EP713 enthielten. Diese transgenen hypovirulenten Stämme wurden am Ort der Isolierung freigesetzt. Die Freisetzung erfolgte nach einem Kahlschlag im Jahr 1997 durch mehrfaches Versprühen einer Konidiensuspension über 4 Jahre. Die zytoplasmatische Übertragung der von der cDNA transkribierten Hypovirus-RNA wurde nachgewiesen und transgene Stämme konnten aus Rindenkrebsen an den behandelten Bäumen reisoliert werden. Es wurde jedoch keine Ausbreitung von transgenen Stämmen oder transkribierter Virus-RNA auf die Kontrollfläche oder die Umgebung beobachtet. Von 1330 Insekten aus 5 verschiedenen Ordnungen wurden 156 Isolate von C. parasitica gewonnen, darunter befand sich ein einziges transgenes Isolat. Nur 2,6 % der im Verlauf dieser Untersuchung von der Rinde isolierten C. parasitica - Stämme (n = 1082) waren mit den nicht transformierten Ausgangsstämmen vegetativ kompatibel. Transgene Ascosporen wurden im Jahr 1999 von 40 % der Perithezien gebildet, im Jahr 2000 aber nur noch von 7,3 %. Ein gleichzeitiger Freisetzungsversuch im Monongahela National Forest in West Virginia in den Jahren 1998 und 1999 mit transgenen Stämmen, die mit dem gleichen CHV1-EP713 - cDNA-haltigen Plasmid konstruiert worden waren, lieferte Daten zur Optimierung der Inokulationsmethode, so dass eine hohe Dichte transgener Ascosporen erzeugt werden konnte. Die Ergebnisse beider Experimente werden im Hinblick auf die Verbesserung der Formulierung und der Applikation sowie auf die Bedeutung des Gleichgewichts zwischen der ökologischen Fitness des Pilzes und der Verminderung der Virulenz diskutiert.