Real-time quantitative PCR: DNA-Bestimmung in isolierten Sporen des Mykorrhizapilzes Glomus mosseae und Nachweis von Phytophthora infestans sowie Phytophthora citricola in ihren Wirtspflanzen

1999

S. 409-416

28 Lit. Ang.

Unselbständiges Werk

200082635

Es wurden spezifische Primer und Fluoreszenzproben zum Nachweis von Mykorrhizapilz- sowie Pathogen-DNA entwickelt. Der Anstieg der im Verlauf der PCR gebildeten Produkte wurde während der Reaktion unter Verwendung des ABI Prism 7700-Gerätes direkt gemessen. Die automatische Quantifizierung der Amplicons fand anhand der Ct-Wertbestimmung statt, wobei ein Vergleich mit den Ct-Werten von Standardproben bekannter DNA-Konzentration erfolgte. Der Ct-Wert ist abhängig von der DNA-Menge und repräsentiert den Schritt im PCR-Zyklus, bei dem erstmalig ein Fluoreszenzsignal gemessen werden kann. DNA wurde aus 11 bzw. 100 Sporen des Mykorrhizapilzes Glomus mosseae extrahiert und mit Hilfe der beschriebenen PCR-Technik quantifiziert. Darüber hinaus ist die Vermehrung von Phytophthora infestans-DNA, dem Erreger der Kraut- und Knollenfäule bei der Kartoffel, in künstlich infizierten Kartoffelknollen sowie natürlich infizierten Feldpflanzen bestimmt worden. Außerdem wurde die DNA des Wurzelfäule-Erregers Phytophthora citricola in Wurzelproben von künstlich infizierten Keimlingen der Buche und Eiche quantifiziert. Die Ergebnisse zeigen, daß sich die neuen fluoreszenzgestützten Techniken zur direkten Quantifizierung von PCR-Produkten universell und leistungsfähig in der modernen phytophathologischen Forschung einsetzen lassen.