Herstellung eines polyklonalen Antikörpers für Phellinus pini und Prüfung seiner diagnostischen Verwendbarkeit

1999

S. 259-272

19 Lit. Ang.

Unselbständiges Werk

200082569

Zur Unterscheidung zwishcen Phellinus pini, Inonotus tomentosus und Inonotus circinatus wurde ein polyklonaler Antikörper gegen den N-terminalen Teil eines 25-kDa Proteins hergestellt, das für P. pini spezifisch ist. Die Eignung dieses polyklonalen Antikörpers gegen ein synthetisches N-terminales Peptid von diesem Protein wurde mittels Western-Blot, indirekt ELISA und Hemmungs-ELISA-Techniken überprüft. Mit Hilfe von HPLC mit Phasenumkehr wurde festgestellt, dass das als Immunogen dienende synthetische N-terminale Peptid zu über 80% rein war. Nach der Immunisierung wurden zu drei verschiedenen Zeitpunkten Antiseren gewonnen. Die Antikörper wurden aus dem rohen Antiserum mittels Immunoaffinitäts-Gelchromatographie gereinigt. Nach eindimensionaler SDS-PAGE ergab sich mittels Western-Immunoblot, dass der polyklonale Antikörper I von P. pini das Immunogen (25 kDa-Protein) - von einer einzigen Ausnahme abgesehen - in allen P. pini-Isolaten nachwies, aber in keinem der Isolate von I. tomentosus und I. circinatus. Trotzdem stellten Kreuzreaktionen ein Problem dar, weil der polyklonale P. pini Antikörper I bei fast allen Isolaten der anderen Arten auch mit Banden von anderem Molekulargewicht reagierte. mit dem indirekten ELISA-Nachweis tendierten die P. pini-Isolate zu einer höheren Affinität mit dem polyklonalen Antikörper als die Nicht-Zielarten, aber es trat doch eine gewisse Kreuzreaktion auf. mit dem Hemmungs-ELISA-Test, der mit unterschiedlichen Antigen-Konzentrationen durchgeführt wurde (1,56-400 ng/100 öl) konnten P. pini und die beiden Inonotus-Arten nicht klar unterschieden werden. Die beim I. tomentosus-Isolat 52 festgestellt geringe Kreuzreaktivität (9%) wurde auch im indirekten ELISA-Test beobachtet. Das P. pini-Isolat 41 zeigte in allen drei Testverfahren die höchste antigene Wirkung. Trotz der Kruezreaktivität ist der Antikörper in Western-Blots für die Diagnose der meisten P. pini-Isolate geeignet.