Rapid silica matrix binding-based isolation of DNA from various wood-rotting and mycorrhizal basidiomycete fungi suitable for their detection by multiplex PCR

2000

S. 664-671

37 Lit. Ang.

Unselbständiges Werk

200076137

In den letzten Jahren entwickelte Techniken des Nachweises und der Quantifizierung pilzlicher Pathogene unter Verwendung der Polymerase-Kettenreaktion (PCR) werden kurz zusammengefasst. Das DNA-Isolationsprotokoll des QIAamp DNA Mini Kits, welches im wesentlichen auf einer SDS/Alkali/Proteinase K/Guanidinisothiocyanat-Lyse und Adsorption der DNA an eine Silika Matrix beruht, erwies sich als eine sehr einfache, schnelle und reproduzierbare Methode zur Extraktion und Reinigung von DNA sowohl aus verschiedenen Basidiomyceten als auch aus infiziertem Pflanzenmaterial. Die gewonne DNA ist bereits von hoher Qualität und kann direkt in verschiedenen PCR-Ansätzen eingesetzt werden, was insbesondere für technisch weniger gut ausgestattete Laboratorien von Nutzen ist. Unter Verwendung mehrerer taxon-spezifischer Primer konnten die beiden wichtigen forstlichen Pathogene Armillaria ostoyae und Heterobasidion annosum in einem PCR-Ansatz (multiple PCR) gleichzeitig detektiert werden. Das Auffinden von H. annosum-'SP'-Hybrid-Genotypen sowohl in Picea sp. als auch in Pinus sp. ist ein Hinweis auf die Möglichkeit des Genflusses zwischen beiden Intersterilitätsgruppen unter natürlichen Bedingungen. Ferner deutet dies auf keine strenge Korrelation zwischen Wirtsart und ISG (Wirtsspezifität) in Europa hin.