Real-time quantitative PCR: DNA-Bestimmung in isolierten Sporen des Mykorrhizapilzes Glomus mosseae und Nachweis von Phytophthora infestans sowie Phytophthora citricola in ihren Wirtspflanzen

Real-time Quantitative PCR: DNA Determination in Isolated Spores of the Mycorrhizal Fungus Glomus mosseae and Monitoring of Phytophthora infestans and Phytophthora citricola in their Respective Host Plants

1999

28 Lit. Ang.

Unselbständiges Werk

5448

200082635

Es wurden spezifische Primer und Fluoreszenzproben zum Nachweis von Mykorrhizapilz- sowie Pathogen-DNA entwickelt. Der Anstieg der im Verlauf der PCR gebildeten Produkte wurde während der Reaktion unter Verwendung des ABI Prism 7700-Gerätes direkt gemessen. Die automatische Quantifizierung der Amplicons fand anhand der Ct-Wertbestimmung statt, wobei ein Vergleich mit den Ct-Werten von Standardproben bekannter DNA-Konzentration erfolgte. Der Ct-Wert ist abhängig von der DNA-Menge und repräsentiert den Schritt im PCR-Zyklus, bei dem erstmalig ein Fluoreszenzsignal gemessen werden kann. DNA wurde aus 11 bzw. 100 Sporen des Mykorrhizapilzes Glomus mosseae extrahiert und mit Hilfe der beschriebenen PCR-Technik quantifiziert. Darüber hinaus ist die Vermehrung von Phytophthora infestans-DNA, dem Erreger der Kraut- und Knollenfäule bei der Kartoffel, in künstlich infizierten Kartoffelknollen sowie natürlich infizierten Feldpflanzen bestimmt worden. Außerdem wurde die DNA des Wurzelfäule-Erregers Phytophthora citricola in Wurzelproben von künstlich infizierten Keimlingen der Buche und Eiche quantifiziert. Die Ergebnisse zeigen, daß sich die neuen fluoreszenzgestützten Techniken zur direkten Quantifizierung von PCR-Produkten universell und leistungsfähig in der modernen phytophathologischen Forschung einsetzen lassen.