Ein Schnellverfahren fuer die Extraktion von DNA von Heterobasidion annosum Myzel und Endocronartium pini Aecidiosporen zur Analyse mittels PCR

1996

14 Lit. Ang.

Unselbständiges Werk

8320

200078628

Ein Schnellverfahren fuer die Extraktion von DNA von Heterobasidion annosum Myzel oder von Endocronartium pini Aecidiosporen wurde entwickelt. Dabei wurde das Pilzmaterial in einem Eppendorfgefaess in einem PCR-kompatiblen Puffer mittels eines von einer elektrischen Bohrmaschine angetriebenen Wegwerfmoersers homogenisiert. Die Ausbeute an DNA war mit dieser Methode relativ gering, genuegte aber fuer die Durchfuehrung einer PCR mit ITS-spezifischen Primern. Das entwickelte Protokoll stellt fuer grosse Mengen von Pilzstaemmen eine billige und schnelle Methode zur Bestimmung der Intersterilitaetsgruppe bei Heterobsidion annosum und fuer Populationsstudien bei Endocronartium pini dar. Der Zeitaufwand fuer die DNA-Extraktion konnte im Vergleich zur Moerser-Pistill-Methode um fast 85% gesenkt werden. Unter Verwendung einer Phenol-Chloroform-Extraktionsloesung war die DNA-Ausbeute mit der oben erwaehnten Methode groesser als mit der Moerser-Pistill-Methode. Die Qualitaet der DNA genuegtte fuer Analysen mit spezifischen Primern und von RAPDs. Es musste jedoch die etwas aufwendigere Phenol-Chloroform-Extraktionsmethode verwendet werden.