Eine einfache, PCR-RFLP gestützte Methode zur Diagnose der Kiefernwelke

2000

S. 157-164

20 Lit. Ang.

Unselbständiges Werk

200063986

Forest Pathology 2000 ; 30(3), S. 157-164

Zur Diagnose der Kiefernwelke wurde eine einfache PCR-RFLP-Methode entwickelt, mit der zwei ähnliche Nematoden-Arten (Bursaphelenchus xylophilus und Bursaphelenchus mucronatus) auf der Basis von einzelnen lebenden oder konservierten Individuen unterschieden werden können. Ein einzelner Nematode wurde in 1 ul destilliertem Wasser aufgenommen und auf einen Objektträger gebracht. Wenn das Wasser weitgehend aufgetrocknet war, wurde der Nematode mit einem 1,5 mm x 1,5 mm grossen Filterpapierstück mit Hilfe einer Pinzette zerquetscht. Das Filterpapier mit den Nematodenüberresten wurde sofort als DNA-Template in den PCR-Puffer gegeben. Es wurden Primer verwendet, die die ITS1-Region, die 5,8S-Region und die ITS2-Region der ribosomalen DNS amplifizieren. Das PCR-Produkt wurde in der Regel von einem einzelnen Nematoden erhalten und die Verdauung des Produktes mit der Restriktionsendonuklease HinfI erlaubte die Unterscheidung zwischen B. xylophilus und B. mucronatus. Diese Methode zur Diagnose des Erregers der Kiefernwelke ist einfach und zuverlässig. Sie konnte auch bei Nematoden angewendet werden, die unter verschiedenen Bedingungen konserviert waren, nicht jedoch bei Verwendung aldehydhaltiger Fixiermittel.